人參皂苷類中藥如何檢測(cè)？看這一篇就夠了~
發(fā)布時(shí)間：2024-10-11 來(lái)源：
前言
人參皂苷是一種固醇類化合物，屬于三萜糖苷類化合物，具有抗氧化、抗炎、血管舒張、抗過(guò)敏、抗糖尿病等多種治療作用。此外，人參皂苷還能有效改善傳統(tǒng)化療藥物的療效，防止對(duì)正常組織的損傷。由于人參皂苷在人參屬產(chǎn)品中的重要性，其含量的檢測(cè)成為了確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的關(guān)鍵步驟。
藥典中涉及到人參皂苷的檢測(cè)主要有人參、紅參、西洋參、三七等品種，其中樣品中人參皂苷Rg1和Re的檢測(cè)是困擾很多分析人員的難點(diǎn)問(wèn)題。由于Rg1和Re容量因子比較接近，在色譜圖上體現(xiàn)為兩者的保留時(shí)間接近，分離度不夠，分析人員需要花費(fèi)大量的時(shí)間進(jìn)行色譜柱篩選工作。為了解決這一問(wèn)題，我們整理了2020版《中國(guó)藥典》涉及到人參皂苷類檢測(cè)的中藥品種，并提出解決方案，解決人參皂苷類中藥檢測(cè)難點(diǎn)問(wèn)題。
篩選思路
中國(guó)藥典人參皂苷類實(shí)驗(yàn)，屬于標(biāo)準(zhǔn)方法重現(xiàn)，對(duì)于人參皂苷Rg1和Re分離度不夠的問(wèn)題，我們更多是通過(guò)篩選色譜柱來(lái)解決。藥典對(duì)于實(shí)驗(yàn)色譜柱描述是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，即C18色譜柱，但是由于鍵合工藝、鍵合相支鏈基團(tuán)、封尾基團(tuán)、色譜柱規(guī)格等不同，常會(huì)導(dǎo)致保留行為差異。本文考察了色譜柱類型、柱長(zhǎng)、流速對(duì)Rg1和Re分離度的影響，具體結(jié)果如下：
1. 色譜柱類型對(duì)分離度影響
首先查看Alphasil VC-C18上Rg1和Re出峰情況，發(fā)現(xiàn)Rg1先出峰。通過(guò)計(jì)算Rg1和Re的疏水性，發(fā)現(xiàn)其疏水性的大小與出峰順序相悖，表明當(dāng)前體系下出峰順序不單單基于疏水作用力。查看Rg1和Re結(jié)構(gòu)式可知，兩者都含有糖單元，保留強(qiáng)弱是糖單元的數(shù)量帶來(lái)的親水作用力差異引起。
通過(guò)比較Alphasil VC-C18和Alphasil VC-C18AQ的分離結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)Alphasil VC-C18AQ整體保留時(shí)間會(huì)更長(zhǎng)，這是因?yàn)樵撋V柱鍵合相是十八烷基硅烷內(nèi)嵌酰胺基，而酰胺基是親水基團(tuán)，會(huì)進(jìn)一步提高色譜柱與Rg1和Re間的作用力。
2. 柱長(zhǎng)對(duì)分離度影響
本文對(duì)色譜柱長(zhǎng)度進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一個(gè)有趣的現(xiàn)象，150mm色譜柱Rg1和Re分離效果優(yōu)于250mm的色譜柱，如圖2所示。這個(gè)結(jié)果與我們過(guò)往經(jīng)驗(yàn)相悖，即相同條件下，色譜柱越長(zhǎng)，化合物分離度應(yīng)該越好。
針對(duì)上述現(xiàn)象，我們進(jìn)行了探究。眾所周知色譜分離過(guò)程是化合物進(jìn)入色譜柱后在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配，多個(gè)組分實(shí)現(xiàn)分離就是借助不同化合物K'差異。在梯度洗脫過(guò)程中，K'不是恒定值，會(huì)隨流動(dòng)相的變化而改變，所以梯度洗脫中常用K'的平均值作為梯度的容量因子。
式中Vm為色譜柱體積，F(xiàn)為流速，tG/ ΔΦ與梯度相關(guān)，S與化合物有關(guān)，已知小分子樣品的S值大約為4。因此，當(dāng)在給定的梯度條件下，化合物的容量因子只與流速F和色譜柱體積Vm有關(guān)。
色譜分析中我們習(xí)慣根據(jù)K'改變后，化合物間相對(duì)保留行為是否改變將化合物分為“常規(guī)樣品”和“非常規(guī)樣品”。其中常規(guī)樣品是K'改變后，相對(duì)保留行為不發(fā)生改變，非常規(guī)樣品剛好相反。我們?cè)倩氐竭@個(gè)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)色譜柱長(zhǎng)度從150mm變?yōu)?50mm后，Rg1和Re分離度變差，說(shuō)明Rg1和Re屬于非常規(guī)樣品范疇。為了驗(yàn)證這一結(jié)論，我們?cè)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，改變流速F，考察K'減小后Rg1和Re分離度是否也會(huì)變差。結(jié)果如圖3所示，我們發(fā)現(xiàn)1mL/min流速下分離度小于1.3mL/min，與色譜柱長(zhǎng)度改變后得到的分離度變化趨勢(shì)一致。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
為了便于大家對(duì)我們的方案有更多了解，在此列舉四種人參皂苷類品種檢測(cè)結(jié)果，其余品種詳情結(jié)果可私信后臺(tái)。
人參
西洋參
人參總皂苷
三七通舒膠囊（三七三醇皂苷）
人參皂苷類品種及推薦色譜柱
為了方便大家選擇合適的色譜柱，我們將藥典中人參皂苷的品種和對(duì)應(yīng)的色譜柱匯總?cè)缦隆?/span>
